轉(zhuǎn)基因植物PAT基因熒光PCR檢測試劑盒【檢驗(yàn)原理】

 本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有轉(zhuǎn)基因植物PAT基因的成分。現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品。

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

固體樣本：用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

1.2 DNA提取

對(duì)于固體標(biāo)本，DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推薦的方法：

• 每個(gè)樣品取2個(gè)平行管。稱取200mg粉碎的樣品，加入1mL預(yù)冷至4℃的抽提液，劇烈搖動(dòng)混勻后，在冰上靜止5min，4℃條件下10000g離心15min，棄上清液；

• 加入600uL預(yù)熱至65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在65℃恒溫保持40min，期間顛倒混勻5次；

• 室溫條件下10000g離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入5uLRNAseA，37℃恒溫30min，分別用等體積苯酚：異戊醇溶液和三氯甲烷：異戊醇溶液各抽提一次；

• 室溫條件下，10000g離心10min，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇，十分之一體積的3mol/L的乙酸鈉溶液（pH=6.5），-20℃放置2-3h；

• 在4℃條件下，10000g離心15min，棄上清液，用70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

• 加入50uL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品DNA溶液。

也可使用等效的DNA提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂DNA提取試劑盒，按說明操作。

?2. 根據(jù)轉(zhuǎn)基因植物PAT基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，能專一性地檢測出樣品中的轉(zhuǎn)基因植物PAT基因成分

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

1.1 判斷

檢測通道 Ct 值＜30.0，有 FAM 熒光信號(hào)檢出，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，判斷樣品為陽性。當(dāng)30.0≤Ct 值≤35.0 時(shí)，且有典型的擴(kuò)增曲線時(shí)，則需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。再次擴(kuò)增后檢測體系的Ct 值仍≤35.0，且有典型的擴(kuò)增曲線。

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